AAT Bioquest 20550/20552 Fluo-4 AM *Ultrapure Grade* *CAS 273221-67-3*

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美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學家研發(fā)、生產和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學檢測領域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術。AAT Bioquest的產品幫助quan世界的科學家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學，免疫學，細胞生物學和分子生物學等領域。AAT Bioquest會不斷介紹新產品，快速的豐富各個領域的產品。

AAT Bioquest  20550  Fluo-4 AM *Ultrapure Grade* *CAS 273221-67-3* 1 mg

AAT Bioquest  20552  Fluo-4 AM *Ultrapure Grade* *CAS 273221-67-3* 5x50 ug

 AAT Bioquest Fluo-4 AM*超純級*

AAT Bioquest  20550  Fluo-4 AM *Ultrapure Grade* *CAS 273221-67-3* 1 mg，產品說明：

鈣測量對于許多生物學研究至關重要。結合鈣時顯示光譜響應的熒光探針使研究人員能夠通過使用熒光顯微鏡、流式細胞術、熒光光譜和熒光酶標儀來研究細胞內游離鈣濃度的變化。Fluo-3和Fluo-4是可見光可激發(fā)鈣指示劑中zui常用的。Fluo-4是Fluo-3的類似物，其中兩種氯取代基被氟取代，這導致488nm處的熒光激發(fā)增加，從而提高熒光信號水平。通過將溶解的指示劑直接添加到含有培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)皿中，細胞可以加載這些鈣指示劑的AM酯形式。然而，F(xiàn)luo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后僅在活細胞中發(fā)出中等熒光，并且需要苛刻的細胞負載條件才能最大限度地提高其細胞鈣反應。Fluo-8®和Cal-520®鈣染料已被開發(fā)用于改善細胞負荷和鈣反應，同時保持最大激發(fā)@~3nm和最大發(fā)射@~4nm的便捷Fluo-490和Fluo-520光譜波長。

平臺

熒光顯微鏡

Excitation FITC

Emission FITC

推薦板 黑色墻壁/透明底部

熒光酶標儀

Excitation 490

Emission 525

Cutoff     515

推薦板 黑色墻壁/透明底部

儀器規(guī)格 底部讀取模式/可編程液體處理

示例協(xié)議

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環(huán)。

氟-4 AM *超純級*儲備溶液

在高質量無水DMSO中制備2至5 mM的Fluo-4 AM儲備溶液。

工作溶液的制備

氟-4 AM *超純級*儲備溶液

在實驗當天，將Fluo-4 AM溶解在DMSO中或將指示劑儲備溶液的等分試樣解凍至室溫。在您選擇的緩沖液（例如，Hanks 和 Hepes 緩沖液）中制備含有 2.20% Pluronic® F-0 的染料工作溶液。對于大多數(shù)細胞系，建議使用終濃度為04-127μM的Fluo-4 AM。細胞上樣所需指標的確切濃度必須根據(jù)經(jīng)驗確定。

注意非離子洗滌劑Pluronic® F-4有時用于增加Fluo-5 AM的水溶性。各種Pluronic® F-127解決方案可以從AAT Bioquest購買。

注意 如果您的細胞含有有機陰離子轉運蛋白，則可以將丙huang舒（4-127 mM）添加到染料工作溶液中（最終孔濃度為1.2-0 mM），以減少脫酯指示劑的泄漏。多種ReadiUse™丙huang舒產品，包括水溶性、鈉鹽和穩(wěn)定溶液，均可從AAT Bioquest購買。

實驗方案樣本

以下是我們推薦的將AM酯加載到活細胞中的方案。此協(xié)議僅提供指南，應根據(jù)您的特定需求進行修改。

1. 在生長培養(yǎng)基中制備細胞過夜。

2. 第二天，將1X Fluo-4 AM工作溶液添加到細胞板中。

注意 如果您的化合物干擾血清，請在上樣染料之前用新鮮的 HHBS 緩沖液替換生長培養(yǎng)基。

3. 將裝載染料的板在37°C的細胞培養(yǎng)箱中孵育30至60分鐘。

注意 孵育染料超過 2 小時可以提高某些細胞系的信號強度。

4. 用您選擇的HHBS或緩沖液（含有陰離子轉運蛋白抑制劑，如1 mM丙huang舒，如果適用）替換染料工作溶液，以去除任何多余的探針。

5. 根據(jù)需要添加xing奮劑，并使用配備FITC濾光片組的熒光顯微鏡或包含可編程液體處理系統(tǒng)（如FDSS，F(xiàn)LIPR或FlexStation）的熒光板讀數(shù)器在490/525 nm截止值515nm處同時測量熒光。

AAT Bioquest  20552  Fluo-4 AM *Ultrapure Grade* *CAS 273221-67-3* 5x50 ug，產品說明：

熒光顯微鏡

興奮 FITC

排放 FITC

推薦板 黑色墻壁/透明底部

熒光酶標儀

興奮 490

排放 525

近路 515

推薦板 黑色墻壁/透明底部

儀器規(guī)格 底部讀取模式/可編程液體處理

鈣測量對于許多生物學研究至關重要。結合鈣時顯示光譜響應的熒光探針使研究人員能夠通過使用熒光顯微鏡、流式細胞術、熒光光譜和熒光酶標儀來研究細胞內游離鈣濃度的變化。Fluo-3和Fluo-4是可見光可激發(fā)鈣指示劑中zui常用的。Fluo-4是Fluo-3的類似物，其中兩種氯取代基被氟取代，這導致488nm處的熒光激發(fā)增加，從而提高熒光信號水平。通過將溶解的指示劑直接添加到含有培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)皿中，細胞可以加載這些鈣指示劑的AM酯形式。然而，F(xiàn)luo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后僅在活細胞中發(fā)出中等熒光，并且需要苛刻的細胞負載條件才能最大限度地提高其細胞鈣反應。Fluo-8®和Cal-520®鈣染料已被開發(fā)用于改善細胞負荷和鈣反應，同時保持最大激發(fā)@~3nm和最大發(fā)射@~4nm的便捷Fluo-490和Fluo-520光譜波長。

物理性質

解離常數(shù)（Kd， nM）： 345

分子量：1096.95

溶劑：二甲基亞胺

光譜特性

消光系數(shù)（厘米-1M-1) ：82000

激發(fā)（納米）：495

發(fā)射（納米）：528

量子產率：0.161

儲存

儲存條件：冷凍（<-15°C）;盡量減少光照

 AAT Bioquest Fluo-4 AM*超純級*

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